ELISA临床质量评价与质量管理

　　报告方式

　　◎定性试验 国内外为便于统一计算，一律按S/C.O方式报告，S为标本A值，C.O即Cut Off值(阳性判定值)

　　◎夹心法和间接法以S/C.O≥1为阳性;

　　竟争法与中和法以S/C.O﹤1为阳性

　　◎Cut Off的计算公式以试剂盒说明书的为准常见的有：

　　◎A) C.O=2.1×N(当N不足0.05时按0.05计)，

　　◎此公式由P/N>2.1换算而来，常用于夹心法。

　　◎B) C.O=0.5×N，从抑止率公式换算而来，

　　◎常用于竟争，中和法

　　◎C) C.O=N+C(C为常数)，用于间接法。

　　◎D) C.O=C×P+N(C为常数)，用于间接法。此公式最客观，但对生产 厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。

　　报告方式

　　定量分析 用已知量的标准品作一系列稀释，ELISA测定，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。

　　ELISA的标准曲线每次都要和待测标本做在同一块板上。

　　◎现有的ELISA定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。

　　因此严禁用定性试剂盒做定量分析。

　　灰区概念

　　把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将CO值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳 性，如仍落在灰区范围内则报告+(阳性)。

　　灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要。

　　灰区的设置有二种：

　　1)C.O×(1±CV) ，

　　CV为该试剂的批内CV& nbsp; (一般在15-20%间);

　　2)C.O±2s，s为实验室做室内质控ROC的s 。

　　高值钩镰效应(HD-HOOK)

　　◎在二位点夹心ELISA中，其剂量反应曲线的高剂量(HIGH DOSE，HD)区段，线性走向不是呈平台状无限后延，而是向下弯曲状，似一只钩子或一把镰刀(HOOK)，MILES(197 4)根据此现象写实性地称之为"HD-HOOK"效应。产生该现象的分子机理有"分子变构说"和"浓度效应"等推论。

　　◎一步法和二步法均存在， 只是前者出现的更早些，大多数是高值低吸光度，很少阴性结果。

　　质量控制(Quality Control，QC)

　　◎英国 Whitehead教授建议生化检验工作的质量控制分为4个步骤：最佳条件的变异(OCV);常规条件的变异(RCV);病人结 果的统计(SPR);室间质量控制(EQA)。前三个步骤即室内质量控制(IQC)。

　　◎在GLP概念里QC即指IQC，其定义为：由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本室工作的可靠性，旨在监测和控制 本室常规工作的精密度，提高批内批间样本检验的一致性，以确定检验报告是否可靠或可否发出的一项工作。

　　◎免疫测定方法的灵敏度和特异性要比生化方法高得多，因此QC手段不能照搬生化模式。分为定性和定量二个方面。

　　质量控制(Quality Control，QC)

　　定性试验：ELISA定性试验的临床意义在于是否检出病原体，与检出量无关，因此QC要保证试验的灵敏度和特异性。生化的质控图 方法仅能观察灵敏度而无法监控特异性。

　　建议使用临界值血清界定法：将试剂盒所设的阴阳性对 照作为内对照指示反应;另设临界值、高值质控血清，正常人血清作为外对照，与标本同时检测，临界值S/C.O≥1，高值质控血清 S/C.O≥10，正常人血清A值在0.05~0.07之间。

　　◎阳性质控血清失控(临界值为灵敏度，高值为"HOOK"效应监控)应重做阴性标本;阴性对照失控应重做阳性标本。

　　◎以表格式记录每块板的外对照实验结果，作为QC资料存档。

　　质量控制(Quality Control)

　　◎定量试验： ELISA定量试验常见于肿瘤因子(如AFP，CEA，CA系列)，激素类，免疫球蛋白类，这些物质在体内有一定的量(正常范围 )，超出这个量才呈病理情况，故需定量测定。定量试验的质控方法可参考生化方式。

　　质量控制(Quality Control)

　　"即刻性"质控：在开始进行质控时，只需要有3个质控血清测定值即可进行质控。当这组数据扩大到20次有效值时就可以计算RCV 的X，s。方法：

　　(1)先将测定值从小到大排列，X1最小，Xn最大 ;

　　◎(2)计算X和s;

　　◎(3)计算SI上限值和下限值。

　　◎SI上=(X最小-X)/S， SI下=(X最大-X)/S

　　◎对照SI表，检查是否出控，

　　SI上、下限≤规定值，在控;

　　SI上或下限>规定值，失控。

　　质量控制(Quality Control)

　　SI值表(即刻性质控)

　　N 3 &nbs p; 4 5 6 7 8 &nbs p; 9 10 11

　　N(3s) 1.15 1.49 1.75 1.94 &n bsp;2.10 2.22 2.32 2.41 2.48

　　N (2s)1.15 1.46 1.67 1.82&nbs p; 1.94 2.03 2.11 2.18 2.23

　　12 13 14 15 16 &n bsp; 17 18 19 20

　　2.55 2.61 2.66 2.71 2.75 2.79 2.82 &n bsp; 2.85 2.88

　　2.29 2.33 2.37 2.41 2.44 2.47 2.50 &n bsp; 2.53 2.56

　　室内质控血清的制备：

　　◎收集阳性血清(无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清,到一定量(够本室使用3-6个月的量);

　　◎传染性病毒阳性需经56℃、10小时灭活后使用;

　　◎过滤，除纤维沉淀物;

　　◎稀释，用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀释;

　　◎测定值，与定值参考品进行对比、求值，一般定在Cut Off值附近的阳性值;

　　◎分装小瓶(每日用量)，加盖、贴签，-20℃冻存备用。

　　不使用质控血清的室内质控

　　◎操作过程的质量控制(分析前、后质控)

　　◎试剂盒阴阳性对照或标准浓度系列。

　　阴对≤0.05 阳对-阴对>0.8 标准浓度落在2s

　　阳对 > 0.80 &n bsp; &n bsp; ; 范围内

　　◎病人资料统计，连续观察病人检测结果的资料，并分析该病人其他化验结果的关系。

　　质量保证

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